INSTITUT

Nom : IRMB
Adresse : CHU Saint Eloi
Téléphone : +33467335696
Email : florence.apparailly@inserm.fr

TUTEUR

Nom : APPARAILLY
Fonction : Directrice de Recherche
Téléphone : +33467335696
Email : florence.apparailly@inserm.fr

STAGE

Sujet : Rôle de miR-342-3p dans l’ostéoclastogénèse

Description courte :
Les maladies inflammatoires chroniques représentent un problème majeur de santé publique. Elles touchent plus de 100 millions de personnes de tout âge en Europe selon l’OMS et leur incidence augmente avec le vieillissement de la population. Outre l’inflammation, elles sont souvent associées à une destruction osseuse allant de l’érosion focale localisée à l’ostéopénie ou l’ostéoporose généralisée qui entraîne des douleurs, un risque accru de fractures et un handicap chez les patients. Les traitements anti-résorptifs tels que les bisphosphonates ou l’inhibition du RANKL sont très efficaces pour bloquer la résorption osseuse mais ont des effets secondaires importants. En particulier, comme la résorption osseuse est couplée à la formation osseuse, ces traitements à long terme inhibent également le remodelage osseux et affectent considérablement la qualité de l’os, augmentant ainsi le risque de fracture et d’ostéonécrose.
La destruction de l’os est due à une augmentation de nombre et de la fonction résorptive des ostéoclastes (OCL). Les OCL sont des cellules multinucléées dérivées de la lignée monocytaire. Ils peuvent provenir de cellules progénitrices érythromyéloïdes ou de la moelle osseuse (MO), ou bien de cellules matures telles les cellules dendritiques (CD), macrophages (MP) et monocytes (MN) avec lesquels ils peuvent fusionner de façon permanente. Ainsi, in vivo, les OCL constituent une population hétérogène de cellules. Grâce à des analyses transcriptomiques des gènes codant pour les protéines (scRNAseq) et les microARN (miRNome), nous avons identifié des signatures moléculaires spécifiques de différents sous-ensembles d’OCL en conditions saines et pathologiques. Parmi celles-ci, miR-342-3p et son gène hôte EVL sont fortement exprimés dans une sous-population d’OCL associée à l’érosion osseuse pathologique. Nous avons montré que miR-342-3p régule positivement la différenciation des OCL par le contrôle de la mobilité des cellules progénitrices.
Étant donné que le miR-342-3p et environ 60% de ses gènes cibles potentiels sont conservés entre l’homme et la souris, nous avons généré une souris floxée knockout conditionnelle (cKO) pour miR-342-3p. Nous souhaitons maintenant tester l’hypothèse selon laquelle la neutralisation in vivo de miR-342-3p dans les progéniteurs des OCL peut interférer avec l’érosion osseuse pathogène et identifier ses mécanismes d’action en conditions physiologiques et pathologiques.
Le projet proposé visera à caractériser l’ostéoclastogénèse dans les souris déficientes pour miR-342-3, à identifier et à valider le(s) gène(s) cible(s) de miR-342-3p in vitro et in vivo.

Activité :
Isolement et culture in vitro des progéniteurs OCL
Tests fonctionnels in vitro des OCL matures
Analyses des données cliniques et paramètres osseux des animaux KO
Expériences de perte et gain de fonction du miRNA et de son gène cible
Quantification par RT-qPCR, ELISA, western blot de l’expression des gènes et du miRNA
Veille bibliographique
Analyses statistiques des résultats
Présentation des résultats sous forme de figures et à l’oral

Compétences requises :
Capacité à travailler en équipe
Dynamisme, adaptabilité, communication
Capacité à se remettre en question
Capacité à réaliser une veille technologique et bibliographique
Anglais lu et parlé
Bases de la biologie cellulaire et moléculaire
Bases en expérimentation animale (souris)

Encadrement :
Florence Apparailly est directrice de recherche à l’INSERM depuis plus de 20 ans et a encadré avec succès (publications et emplois) 12 thèses à l’université de Montpellier et de très nombreux étudiants en Master.
L’encadrement se fera comme suit: définition des objectifs généraux lors d’un premier entretien avec F. Apparailly, formation aux techniques requises par une ingénieure de l’équipe, travail quotidien en binome avec une ingénieure déjà formée aux techniques du projet, supervision de la progression du travail par F. Apparailly au travers de réunions hebdomadaires formelles et possibilité d’avoir des rencontres informelles chaque fois que nécessaire, présentation orale du travail devant l’équipe 1 fois/an lors de lab meetings.

Gratification de stage : Sur ressources propres de l’équipe d’accueil

Tutelle de stage : INSERM